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      應(yīng)用案例
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      天木生物MISS cell助力放線菌分離培養(yǎng)和高通量篩選

      來源:   作者: 發(fā)布日期:2024-04-24 訪問量:3117
      、放線菌

            放線菌(Actinomycetes)是一種原核生物類群,在自然界中分布很廣,是一類極其重要的微生物資源,與人類的生產(chǎn)和生活關(guān)系極為密切,最突出的特性就是能產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素。放線菌能形成分枝菌絲和分生孢子,呈菌絲狀生長,主要通過形成無性孢子的方式進(jìn)行繁殖,也可借菌體分裂片段繁殖。放線菌長到一定階段,一部分氣生菌絲形成孢子絲,孢子絲成熟便分化形成許多孢子,稱為分生孢子。


      圖片10

      放線菌模式圖


      圖片2 圖片3

      放線菌的氣生菌絲和孢子絲


            

            由于孢子因其體積小、質(zhì)輕、易飄散等特點,極易造成同一固體平板上的不同單克隆菌落間產(chǎn)生交叉污染問題,給放線菌的培養(yǎng)和分離帶來了巨大挑戰(zhàn)。

            天木生物的高通量微升級液滴培養(yǎng)組學(xué)系統(tǒng)——MISS cell,可將細(xì)胞(孢子)包裹于液滴中,形成獨立的培養(yǎng)單元,避免菌絲或孢子飛散至其它液滴單克隆內(nèi),從而克服菌株間的交叉污染問題,提高獲得放線菌單克隆的效率和純度。本實驗基于菌絲體實現(xiàn)放線菌的分離與培養(yǎng),為不產(chǎn)孢子的絲狀菌的分離培養(yǎng)提供一種分離培養(yǎng)方法。


      二、使用MISS cell分離培養(yǎng)放線菌

      1.樣品預(yù)處理,確定上機(jī)濃度

            收集放線菌菌絲體(30℃,培養(yǎng)4天),加入玻璃株打碎菌絲過濾,通過血球計數(shù)板計數(shù),用BM培養(yǎng)基將樣品濃度稀釋至500-1000 CFU/mL,工作流程如下:


      miss cell實驗方案20230612-02


      圖3 樣本處理工作流程



      2.MISS cell分離培養(yǎng)

            本實驗共生成2500個液滴,培養(yǎng)96h后進(jìn)行檢測及分選,經(jīng)過60分鐘的分選,共得到含菌液滴約500個,MISS cell儀器工作流程如下圖所示。

      圖片5

      圖4 MISS cell工作流程



      3.實驗結(jié)果

      1)生長速率對比:不同時間點觀察液滴及平板放線菌生長情況,液滴培養(yǎng)1天后液滴中出現(xiàn)生長,平板培養(yǎng)6天后出現(xiàn)菌絲生長,液滴培養(yǎng)放線菌生長速率顯著優(yōu)于平板培養(yǎng),放線菌的最佳培養(yǎng)分選時間為4天。


      圖片6

      圖5 放線菌在固體平板上的生長情況


      圖片7

      圖6 放線菌在液滴中的生長情況



      2)放線菌液滴分選結(jié)果圖

      圖片8

      圖7 放線菌培養(yǎng)4天,在OD模式下的分選情況


      圖片9

      圖8 放線菌培養(yǎng)4天,在熒光模式下的分選情況



      、天木生物MISS cell儀器為放線菌的分離、培養(yǎng)和篩選過程提供高通量、高效自動化解決方案

            本研究中使用天木生物的MISS cell儀器,共生成2500個液滴,分選得到單菌落約500個,實現(xiàn)放線菌自動化培養(yǎng)和分選,有效避免了菌株之間的交叉污染。同時,對于不產(chǎn)孢子的絲狀菌也提供了一種分離培養(yǎng)方法。本次實驗共計消耗培養(yǎng)基8ml,全程自動化實現(xiàn)液滴生成、培養(yǎng)和篩選至96孔板中,大幅提升單克隆獲取效率,同時有效避免交叉污染問題,為放線菌的單克隆篩選提供了高效工具平臺。
            天木生物MISS cell儀器為包括放線菌在內(nèi)含孢子的細(xì)菌,提供了單克隆培養(yǎng)和高通量篩選的高效自動化實驗平臺,為菌株的培養(yǎng)和篩選提供強力支持


      、放線菌

            放線菌(Actinomycetes)是一種原核生物類群,在自然界中分布很廣,是一類極其重要的微生物資源,與人類的生產(chǎn)和生活關(guān)系極為密切,最突出的特性就是能產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素。放線菌能形成分枝菌絲和分生孢子,呈菌絲狀生長,主要通過形成無性孢子的方式進(jìn)行繁殖,也可借菌體分裂片段繁殖。放線菌長到一定階段,一部分氣生菌絲形成孢子絲,孢子絲成熟便分化形成許多孢子,稱為分生孢子。


      圖片10

      放線菌模式圖


      圖片2 圖片3

      放線菌的氣生菌絲和孢子絲


            

            由于孢子因其體積小、質(zhì)輕、易飄散等特點,極易造成同一固體平板上的不同單克隆菌落間產(chǎn)生交叉污染問題,給放線菌的培養(yǎng)和分離帶來了巨大挑戰(zhàn)。

            天木生物的高通量微升級液滴培養(yǎng)組學(xué)系統(tǒng)——MISS cell,可將細(xì)胞(孢子)包裹于液滴中,形成獨立的培養(yǎng)單元,避免菌絲或孢子飛散至其它液滴單克隆內(nèi),從而克服菌株間的交叉污染問題,提高獲得放線菌單克隆的效率和純度。本實驗基于菌絲體實現(xiàn)放線菌的分離與培養(yǎng),為不產(chǎn)孢子的絲狀菌的分離培養(yǎng)提供一種分離培養(yǎng)方法。


      二、使用MISS cell分離培養(yǎng)放線菌

      1.樣品預(yù)處理,確定上機(jī)濃度

            收集放線菌菌絲體(30℃,培養(yǎng)4天),加入玻璃株打碎菌絲過濾,通過血球計數(shù)板計數(shù),用BM培養(yǎng)基將樣品濃度稀釋至500-1000 CFU/mL,工作流程如下:


      miss cell實驗方案20230612-02


      圖3 樣本處理工作流程



      2.MISS cell分離培養(yǎng)

            本實驗共生成2500個液滴,培養(yǎng)96h后進(jìn)行檢測及分選,經(jīng)過60分鐘的分選,共得到含菌液滴約500個,MISS cell儀器工作流程如下圖所示。

      圖片5

      圖4 MISS cell工作流程



      3.實驗結(jié)果

      1)生長速率對比:不同時間點觀察液滴及平板放線菌生長情況,液滴培養(yǎng)1天后液滴中出現(xiàn)生長,平板培養(yǎng)6天后出現(xiàn)菌絲生長,液滴培養(yǎng)放線菌生長速率顯著優(yōu)于平板培養(yǎng),放線菌的最佳培養(yǎng)分選時間為4天。


      圖片6

      圖5 放線菌在固體平板上的生長情況


      圖片7

      圖6 放線菌在液滴中的生長情況



      2)放線菌液滴分選結(jié)果圖

      圖片8

      圖7 放線菌培養(yǎng)4天,在OD模式下的分選情況


      圖片9

      圖8 放線菌培養(yǎng)4天,在熒光模式下的分選情況



      、天木生物MISS cell儀器為放線菌的分離、培養(yǎng)和篩選過程提供高通量、高效自動化解決方案

            本研究中使用天木生物的MISS cell儀器,共生成2500個液滴,分選得到單菌落約500個,實現(xiàn)放線菌自動化培養(yǎng)和分選,有效避免了菌株之間的交叉污染。同時,對于不產(chǎn)孢子的絲狀菌也提供了一種分離培養(yǎng)方法。本次實驗共計消耗培養(yǎng)基8ml,全程自動化實現(xiàn)液滴生成、培養(yǎng)和篩選至96孔板中,大幅提升單克隆獲取效率,同時有效避免交叉污染問題,為放線菌的單克隆篩選提供了高效工具平臺。
            天木生物MISS cell儀器為包括放線菌在內(nèi)含孢子的細(xì)菌,提供了單克隆培養(yǎng)和高通量篩選的高效自動化實驗平臺,為菌株的培養(yǎng)和篩選提供強力支持


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