本期為您推薦合肥工業(yè)大學(xué)張洪斌教授研究團隊發(fā)表在知名期刊《食品與發(fā)酵工業(yè)》上的一篇文章：誘變選育 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶高產(chǎn)菌及發(fā)酵條件優(yōu)化。
文章摘要內(nèi)容如下：
泛酸，也被稱為維生素 B5，D 構(gòu)型的右旋泛酸為其活性成分，是動物體內(nèi)合成乙酰輔酶 A 的重要前體物質(zhì)，也是大多數(shù)天然食物中存在的必需微量營養(yǎng)素。合成 D-泛酸的關(guān)鍵在于拆分 DL-泛解酸內(nèi)酯獲得高光學(xué)純度的 D-泛解酸內(nèi)酯。生物酶法拆分手性藥物中間體越來越受到關(guān)注，即利用 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶選擇性水解 DL-泛解酸內(nèi)酯中的 D-泛解酸內(nèi)酯成 D-泛解酸，D-泛解酸在酸性條件下加熱得到 D-泛解酸內(nèi)酯，從而實現(xiàn) DL-泛解酸內(nèi)酯的拆分。目前該方法面臨的問題是，原始來源菌酶活較低，在工業(yè)上很難得到大規(guī)模應(yīng)用。
該文以實驗室前期篩選得到的一株具有 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶活力的鐮孢霉菌（酶活為 1.42 U/mL）為出發(fā)菌株，先后利用常溫室壓等離子和紫外-氯化鋰（UV-LiCl）技術(shù)，對其進行了四輪遞進誘變選育，以篩選得到高活性 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶菌株。實驗得到 ARTP 誘變的最佳處理時間為 80 s，UV-LiCl 誘變的最佳處理時間為 80 s（LiCl 濃度 0.6%）。通過變色圈大小初篩和搖瓶復(fù)篩，最終篩選得到一株酶活達(dá)3.46 U/mL 的菌株 4-80-6，酶活較出發(fā)菌株提高了 143.66%，并且通過八代傳代培養(yǎng)，該菌株遺傳性較為穩(wěn)定。以20%的底物濃度催化反應(yīng)時，突變株 4-80-6 水解率由原始菌 11.6%提高到 17.1%，光學(xué)純度由 93.5%提高到 98.3%。對突變株 4-80-6 菌株進行發(fā)酵條件優(yōu)化，得到最佳產(chǎn)酶條件為：培養(yǎng)溫度 25 ℃，培養(yǎng)基初始 pH 8.5，接種量10.5%，培養(yǎng)時間 48 h，該條件下酶活為 4.33 U/mL，比優(yōu)化前提高了 25.14%。該研究結(jié)果為 DL-泛解酸內(nèi)酯酶法拆分的工業(yè)應(yīng)用提供了一種有效策略。
本期為您推薦合肥工業(yè)大學(xué)張洪斌教授研究團隊發(fā)表在知名期刊《食品與發(fā)酵工業(yè)》上的一篇文章：誘變選育 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶高產(chǎn)菌及發(fā)酵條件優(yōu)化。
文章摘要內(nèi)容如下：
泛酸，也被稱為維生素 B5，D 構(gòu)型的右旋泛酸為其活性成分，是動物體內(nèi)合成乙酰輔酶 A 的重要前體物質(zhì)，也是大多數(shù)天然食物中存在的必需微量營養(yǎng)素。合成 D-泛酸的關(guān)鍵在于拆分 DL-泛解酸內(nèi)酯獲得高光學(xué)純度的 D-泛解酸內(nèi)酯。生物酶法拆分手性藥物中間體越來越受到關(guān)注，即利用 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶選擇性水解 DL-泛解酸內(nèi)酯中的 D-泛解酸內(nèi)酯成 D-泛解酸，D-泛解酸在酸性條件下加熱得到 D-泛解酸內(nèi)酯，從而實現(xiàn) DL-泛解酸內(nèi)酯的拆分。目前該方法面臨的問題是，原始來源菌酶活較低，在工業(yè)上很難得到大規(guī)模應(yīng)用。
該文以實驗室前期篩選得到的一株具有 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶活力的鐮孢霉菌（酶活為 1.42 U/mL）為出發(fā)菌株，先后利用常溫室壓等離子和紫外-氯化鋰（UV-LiCl）技術(shù)，對其進行了四輪遞進誘變選育，以篩選得到高活性 D-泛解酸內(nèi)酯水解酶菌株。實驗得到 ARTP 誘變的最佳處理時間為 80 s，UV-LiCl 誘變的最佳處理時間為 80 s（LiCl 濃度 0.6%）。通過變色圈大小初篩和搖瓶復(fù)篩，最終篩選得到一株酶活達(dá)3.46 U/mL 的菌株 4-80-6，酶活較出發(fā)菌株提高了 143.66%，并且通過八代傳代培養(yǎng)，該菌株遺傳性較為穩(wěn)定。以20%的底物濃度催化反應(yīng)時，突變株 4-80-6 水解率由原始菌 11.6%提高到 17.1%，光學(xué)純度由 93.5%提高到 98.3%。對突變株 4-80-6 菌株進行發(fā)酵條件優(yōu)化，得到最佳產(chǎn)酶條件為：培養(yǎng)溫度 25 ℃，培養(yǎng)基初始 pH 8.5，接種量10.5%，培養(yǎng)時間 48 h，該條件下酶活為 4.33 U/mL，比優(yōu)化前提高了 25.14%。該研究結(jié)果為 DL-泛解酸內(nèi)酯酶法拆分的工業(yè)應(yīng)用提供了一種有效策略。
